Préparation de grille avec membrane de carbone sur mesure pour la Cryou-EM : Vitrification
On dépose une goutte de la solution contenant l’échantillon dispersé sur une grille de cuivre avec une fine couche de carbone de 5nm d’épaisseur avec des trous bien espacés traitée préalablement pour la rendre hydrophile. Un protocole de préparation de ces membranes que nous avons développé est présenté dans la figure 1.
La taille de la goutte suspendue à la grille est réduite par aspiration jusqu’à obtenir une très fine couche (inferieure au micromètre). Ensuite, la grille est plongée très rapidement dans l’éthane liquide, obtenu par refroidissement de l’éthane gazeux par l’azote liquide (–190°C), ceci a pour effet de rendre amorphe la glace et de protéger l’échantillon contre les dégâts provoqués lors de son insertion sous vide du microscope (figure 8). Cependant, la structure amorphe de l’eau peut être convertie en une forme cristalline si on réchauffe aux environs de -140ºC. Il faut noter que la glace vitreuse peut être maintenue autour de l’échantillon pendant des périodes prolongées si la température reste en dessous de -160ºC.39,40
